花叶金线莲试管花卉培养基配方筛选

摘要：以花叶金线莲单芽为试验材料，研究不同基本培养基（MS、B5、改良MS）、蔗糖含量及杀菌剂益培隆浓度等关键因素对其株型控制和污染控制的影响，探讨适合于试管花卉的培养基配方，以期建立花叶金线莲试管花卉培养技术。结果表明：以改良MS为基本培养基，添加蔗糖20 g·L-1的培养基有利于花叶金线莲试管花卉的株型控制;培养基中添加1.5 mg·L-1益培隆有利于培养基污染控制;筛选出适宜花叶金线莲试管花卉培养的培养基配方为改良MS + 蔗糖20 g·L-1 + 益培隆1.5 mg·L-1+ 琼脂粉6.0 g·L-1 + 食用色素0.02 g·L-1，培养6个月，株型控制良好，观赏效果较佳。研究结果为花叶金线莲试管花卉开发应用提供了技术基础。

关键词：花叶金线莲;试管花卉;组织培养

中图分类号：S 68文献标识码：A文章编号：1008-0384（2018）12-1275-05

试管花卉是通过植物组织培养技术，在人工控制的无菌环境下，在玻璃或透明塑料容器等相对密封空间内培养迷你微型植物。试管花卉植株小，长在精致的小试管或玻璃瓶内，便于管理与携带;与传统种植方式相比，是一种新颖、独特的花卉观赏、培植方式，满足了现代人的猎奇心理，具有广阔的发展前景[1-2]。但目前试管花卉培养技术在植株寿命及株型控制、培养基污染控制等方面存在技术难题，且开发品种单调，特色品种挖掘不够[3-4]。近年来以观叶为主的试管花卉成为市场主流，但品种仅局限于天南星科的一些观叶植物品种等[5-7]，远远满足不了人们对“新、奇、特”花卉产品的日益需求。因此，发掘特色花卉品种及建立其相配套的试管花卉培养技术具有现实意义。

金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）lindl.为兰科开唇兰属多年生草本植物，是我国传统名贵药材，也是十分珍贵的室内小型观叶植物[8-9]。本课题组于2010年在福建金线莲组培快繁中发现一株突变单株，经多次继代、定向选择育成性状稳定的花叶金线莲新品种。其叶色墨绿与金黄相嵌，色彩鲜明，色泽亮丽，因其独特、新颖，具有较高的观赏价值，特别适合作为制作试管花卉的材料[10-11]。课题组前期对花叶金线莲茎段诱导植株再生、丛生芽繁殖体系的构建等方面进行了研究[12]。然而试管花卉培养不是简单等同于植物的组织培养，试管花卉培养所需求的培养基必须在满足植株生长需要的同时，又可以控制植株生长，并要求植株在不继代培养的情况下仍能在较长一段时间（至少3个月）里稳定生长、存活，且保持植株可观赏性。因此，株型与污染控制成为试管花卉培养关键技术。

培养基是试管花卉材料生存和发育的根基，对生长至关重要[13]。前人对孔雀草、长寿花及多肉类植物姬松、玉翁、生石花等的試管花卉培养技术进行了报道[2-7]。齐迎春等[3]认为随着蔗糖浓度的升高，植株高度显著降低，康冬茹等[2]认为多肉类植物姬松在彩色培养基1/2MS添加0.25 mg·L-1的食用色素亮蓝，观赏效果佳且对植株生长无毒害。不同植物的试管花卉培养基受基因型等影响较大，应根据植物特性，摸索适合于特定基因型材料的培养基配方与培养方法。而污染的控制也是提高试管花卉的观赏价值与延长寿命的重要因素。试管花卉产品移出实验室无菌环境后，因培植环境改变以及消费者猎奇心理等原因，被打开瓶盖或瓶盖在观赏过程掉落等，可能导致试管花卉工艺品污染现象，影响观赏效果。目前还未见杀菌剂在试管花卉培养中应用的报道。因此，本研究在建立的花叶金线莲离体诱导植株再生培养技术的基础上[9]，以其组培获得的无菌材料单芽为试验材料，通过研究不同基本培养基、蔗糖浓度及杀菌剂益培隆浓度等关键因素对其株型控制和污染控制的影响试验，探讨适合于花叶金线莲试管花卉的培养基配方，建立花叶金线莲试管花卉培养技术，为试管花卉开发应用提供技术基础。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1花叶金线莲以花叶金线莲单芽为试验材料。试验在福建省特色花卉工程技术研究中心花卉组培实验室进行。

1.1.2试剂试剂均为国药集团化学试剂有限公司生产的分析纯试剂，琼脂粉产地日本，强度1 400 g·cm-2 ;花宝1号产地美国，其N、P、K质量比7∶6∶19。益培隆是一种长效、广谱、高活性，且为新型组织培养专用防污染杀菌剂。

1.2方法

1.2.1培养基配方筛选

选择MS、B5、改良MS等3种为基本培养基，分别添加不同质量浓度蔗糖（20.0、25.0 g·L-1）、琼脂粉6.0 g·L-1及食用色素亮蓝0.02 g·L-1，设6个处理（表1）。各处理接种10瓶，每瓶接种3株。每个月观察生长情况，观测株高、叶片数、根数及根长等指标。

1.2.2培养基杀菌剂质量浓度筛选

培养基经过高压灭菌，不开盖情况下是不易落菌，而作为试管花卉的培养基，因人们对其好奇等因素，人为开盖等情况无法避免，培养基污染将严重影响试管花卉的观赏效果。以1.2.1中筛选出的培养基配方作为进一步试验的培养基，在培养基中分别添加0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg·L-1杀菌剂益培隆（处理K1～K6），以不添加益培隆为CK，分2组，第一组接入花叶金线莲材料，每个月观察生长情况，并测定株高、叶片数、根数及根长等指标，观测6个月;第二组不接入材料，连续开盖观察21 d，观察落菌情况。各处理接种10瓶，每瓶接种3株。

1.3培养方式与培养条件

采用固体培养基培养方式， pH值5.8～6.0，培养温度（25±2）℃，光强2 000～2 500 lx，光照时间12 h·d -1。

1.4数据处理

采用Excel 2007和DPS 软件进行数据分析。

2结果与分析

2.1不同培养基配方对花叶金线莲试管花卉生长的影响

从表2可以看出，基本培养基相同，不同蔗糖浓度处理，培养6个月时，株高增长量、叶片增加量、根数及根长各处理之间差异显著，株高增长量与叶片增加量均随着蔗糖浓度的增加而变大，高浓度蔗糖促根生长。可见，为达到株型控制目的，低质量浓度蔗糖20 g·L-1更有利于延缓试管苗生长。蔗糖浓度相同，不同基本培养基处理，即提供生长的营养成分不同，培养6个月植株在株高增长量、根数及根长生长表现上存在显著差异，以改良MS为基本培养基的T5配方在株高、叶片控制生长方面的效果最好，即综合考虑株高增长量、叶片增长量及发根情况，筛选出适宜试管花卉培养的培养基配方为改良MS + 蔗糖20 g·L-1 + 琼脂粉6.0 g·L-1 + 食用色素亮蓝0.02 g·L-1，培养6个月，株高增长量为1.7 cm，叶片生长量为3.1片，平均生根数2.5条，平均根长1.6 cm，叶片鲜亮，株型控制较好。

2.2培养基添加杀菌剂的抑菌效果及对花叶金线莲生长的影响

2.2.1益培隆抑菌效果分析

从表3可以看出，不添加益培隆的培养基在开盖第3 d即出现真菌污染，随着益培隆质量浓度的逐渐升高，落菌污染时间逐渐延迟，益培隆质量浓度≥1.0 mg·L-1可保持7 d不落菌（图1），益培隆质量浓度≥2.0 mg·L-1可保持14 d不落菌，益培隆质量浓度达3.0 mg·L-1可保持21 d不落菌。可见，益培隆质量浓度在1.0～3.0 mg·L-1均能达到不同程度的抑菌效果。

2.2.2益培隆对花叶金线莲试管花卉生长的影响

培养基中添加不同质量浓度益培隆对试管花卉培养的影响结果见表4。从表4可以看出，在试管花卉培养过程，各处理株高增长量、根长等差异不显著，株高增长量在1.3～1.8 cm，根长在1.2～1.9 cm，总体植株生长缓慢。添加不同质量浓度益培隆处理明显影响培养基的颜色，随着益培隆浓度的升高，蓝色培养基颜色逐渐变暗，尤其在益培隆质量浓度达2.5～3.0 mg·L-1时，颜色变暗程度突出，极大影响了观赏效果。

综合考虑开盖落菌试验污染控制结果与观赏效果，认为适宜的益培隆质量浓度为1.5 mg·L-1，即K3处理，适宜花叶金线莲试管花卉培养的适宜培养基配方为改良MS + 蔗糖 20 g·L-1+益培隆1.5 mg·L-1 + 琼脂粉 6.0 g·L-1 + 食用色素 0.02 g·L-1。应用此配方制作出的花叶金线莲试管花卉既能使试管苗在瓶内正常生长，又可以有效控制株型，且能避免培养基污染问题。

3讨论与结论

作为新兴的花卉观赏种类，试管花卉在国内还处于研究的初级阶段，虽然不同植物的培养技术存在一定共性，但是不同品种资源材料易受到基因型、培养基种类、附加成分和培养环境等多种因素的影响，在对特定基因型材料进行培养时，应针对品种特性，通过具体试验，设计培养方案，才能摸索出适合于特定基因型材料的培养基配方与培养方法[14-15]。

本研究以MS、B5、改良MS为作为基本培养基，结果表明改良MS培养基在花叶金线莲试管花卉控制生长方面的效果最好。MS基本培养基钾盐、铵盐含量较高，为高盐成分培养基，组织培养时会造成营养过剩，B5为高硝酸盐培养基，含较高的盐酸硫胺素和较低的铵态氮，在兰花培养上适用于发芽和壮苗培养[16]。改良MS与MS基本培养基组分相比，降低了N、K含量，提高了P含量，能够减缓植株生长，植株保持一定生长的同时，也减缓了试管苗的老化，达到有效控制株型、延长植株寿命的目的。益培隆为新型组织培养专用防污染杀菌剂，益培隆浓度选择对无菌苗培养至关重要，浓度过高易导致无菌苗死亡及培养一定时间后培养基色泽改变，影响观赏效果;浓度过低易导致污染出现，选择合适浓度既能保证制作的试管工艺不受污染，又能保证观赏效果。本研究添加质量浓度为1.0～3.0 mg·L-1益培隆不但可以防污染，还可以协同抑制植株生长，对株型控制起到一定作用。综合开盖落菌试验污染控制结果与观赏效果，筛选出适宜花叶金线莲试管花卉的培养基配方为改良MS +蔗糖 20 g·L-1+ 益培隆1.5 mg·L-1+ 琼脂粉 6.0 g·L-1+ 食用色素 0.02 g·L-1。应用此配方培养的花叶金线莲试管花卉至少能保持6个月的观赏期，且株型控制及污染控制效果较好。

有关花叶金线莲试管花卉培养基配方、株型控制及污染防控等合理培养体系研究还有待进一步试验探讨。

參考文献：

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（责任编辑：柯文辉）

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